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PCR試劑盒的使用注意事項(xiàng)有哪些

更新時(shí)間:2022-11-25   點(diǎn)擊次數(shù):1187次
  PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點(diǎn),通過變性、退火、延伸等步驟,體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。
  PCR試劑盒是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù),能快速特異地在體外擴(kuò)增一定長(zhǎng)度的DNA段??捎糜诨蚍蛛x克隆,序列分析,基因表達(dá)調(diào)控,基因多態(tài)性研究等許多方面,且價(jià)格合適。
  PCR試劑盒的使用注意事項(xiàng)有哪些:
  注意事項(xiàng)一:保存
  未拆封的試劑盒,請(qǐng)于-20℃保存;拆封之后,應(yīng)在4℃保存。
  在試劑消耗量較少的實(shí)驗(yàn)室,可以考慮將按照組分單獨(dú)分裝,后保存在-20℃。
  注意事項(xiàng)二:配置
  試劑盒內(nèi)所含各組份都是混合物,在靜置情況下會(huì)發(fā)生分層現(xiàn)象,因此,現(xiàn)配現(xiàn)用,震蕩混勻,避免反復(fù)凍融,避免預(yù)混。其中,反復(fù)凍融將大幅縮短使用壽命。
  在擴(kuò)增體系的選擇時(shí),盡量選擇標(biāo)準(zhǔn)體系,再根據(jù)檢材情況加入模板,之后切勿忘記以PCR用水補(bǔ)足擴(kuò)增體系。
  注意事項(xiàng)三:切勿預(yù)混
  因試劑盒中酶的活性較高,將各組份按照比例混合之后,即使沒有達(dá)到它的較適溫度,但也可能發(fā)生與引物結(jié)合,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)丟位點(diǎn)或者雜合子純化等情況。
  注意事項(xiàng)四:陰陽(yáng)性參照
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)受提取、擴(kuò)增和電泳等多個(gè)環(huán)節(jié)的影響,因此,每次擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)都應(yīng)該添加一組陰陽(yáng)性參照。這樣,當(dāng)結(jié)果異常的時(shí),我們就可以結(jié)合陰陽(yáng)性參照的表現(xiàn),排查問題出在哪個(gè)環(huán)節(jié)。
  注意事項(xiàng)五:陽(yáng)性參照是否通用
  雖然多數(shù)試劑盒的陽(yáng)性參照都是007,但是案件試劑盒和建庫(kù)試劑盒的陽(yáng)性參照濃度不同,通常來(lái)說案件試劑盒的濃度更低。
  注意事項(xiàng)六:擴(kuò)增程序
  擴(kuò)增程序是能夠?qū)⒃噭┖懈笮馨l(fā)揮出來(lái)而設(shè)計(jì),切勿隨意更改;再者,不同試劑盒所含酶的升溫模式也有不同,因此,在設(shè)置擴(kuò)增程序時(shí),要選擇對(duì)應(yīng)的升溫模式。
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